高产淀粉酶黑曲霉菌种诱变选育及固态发酵条件研究

真菌产生的淀粉酶具有水解条件温和耐酸的特性,具有广泛的应用价值。为了筛选高产淀粉酶黑曲霉菌种,通过采用微波诱变和硫酸二乙酯处理等方法联合诱变黑曲霉出发菌株,并对筛选出的黑曲霉菌株固态发酵产α-淀粉酶最佳条件进行了优化。结果显示,经过微波诱变16 s和硫酸二乙酯处理20 min筛选出了一株高产α-淀粉酶菌株黑曲霉MD-17,其最佳产酶固态发酵条件为：麸皮与玉米粉干重比为7：3,硫酸铵0.6%,初始pH=5,料水比1：1.5,α-淀粉酶的酶活力最高达到6011 U/g湿曲。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶菌株的筛选

采用牛津杯平板透明圈法对研究室保藏的17株黑曲霉菌株进行了β-葡萄糖苷酶产生菌初筛,得到5株透明圈相对明显的菌株,经固态发酵产酶复筛及相关纤维素酶活力的检测,选出一株β-葡萄糖苷酶酶活力高、且纤维素酶活力也较高的菌株niger-2,其β-葡萄糖苷酶酶活力为78.75 U/g、纤维素酶(CMC)活力为312.15 U/g...     

一株海洋芽孢杆菌调节黄曲霉aflR和aflJ表达研究

从中国东部黄海中分离出一株对黄曲霉的生长及黄曲霉毒素合成具有显著抑制效果的海洋芽孢杆菌.采用滤纸片法研究其抑制黄曲霉菌丝延长的情况,用Beacon试剂盒检测抑制毒素合成实验中毒素含量,用实时定量反转录聚合酶链式反应技术(real-time qRT-PCR)重点对aflR、aflJ两个基因的转录产物进行定量测定.实验结果表明该株海洋芽孢杆菌对抑制黄曲霉生长及毒素合成和aflR、aflJ的转录有较显著的效果.     

松墨天牛致病菌葡萄曲霉安全性研究

松墨天牛生葡萄曲霉Aspergillus vitis分生孢子对水蚤、果蝇、鲤鱼和对小白鼠经口、经皮、吸入急性毒性试验结果表明：水蚤在20mg／L浓度下72h死亡率23.3％;果蝇在浓度为21mg／L下72h死亡率15．0％;鲤鱼在浓度为22mg／L时72h死亡率4．0％。用3种途径对小鼠的试验表明,小鼠无死亡现象发生,小鼠的体重也无明显影响。该葡萄曲霉对这些实验动物表现为低毒或微毒。     

海洋烟曲霉菌代谢活性物质的萃取

以海洋烟曲霉菌为出发菌,在适宜的发酵条件下进行培养,提取代谢产物并检测其对白色念珠菌抑菌性.分别以硫酸铵、石油醚、乙酸乙酯为萃取剂,研究硫酸铵质量分数和有机溶剂的pH值对海洋烟曲霉菌代谢活性物质萃取效果的影响.结果表明,粗酶液的适宜萃取条件:萃取剂为石油醚,pH值为6,粗酶液与有机溶剂的体积比为1∶1.采用质量分数为70%的硫酸铵沉淀,萃取活性物质的酶活性最大为16.0μkat.L-1,比原粗酶液的酶活(7.9μkat.L-1)提高1倍;而采用石油醚为萃取剂,所萃取活性物质的酶活性最大为20.5μkat.L-1,比原粗酶液的酶活提高2.58倍,且抑菌性能最好,抑菌率达60%左右.     

米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的条件优化

主要研究了米曲霉利用农业废弃物产木聚糖酶的情况.对实验室保藏菌株米曲霉M-9生长所必需的碳源、氮源、培养温度和培养基初始pH等条件进行了优化.实验表明,此菌株最适碳源是粒度小于0.08 mm的玉米芯(质量分数为4.0%),最佳复合氮源是质量分数为1.2%的酵母提取物加质量分数为0.8%的大豆蛋白胨,最适初始pH值为7.5,最适产酶温度为30℃,最佳转速为200 r/m in,添加表面活性剂吐温60对菌株产酶有促进作用.在最适培养条件下,培养5 d,米曲霉沪酿M-9木聚糖酶的产量高达795.93 U/mL,是优化前的2.2倍.     

日本曲霉酸性蛋白酶的分泌表达、性质及其在猪肉嫩化中的应用

为研究日本曲霉酸性蛋白酶的分泌表达、性质及其在猪肉嫩化中的应用。将日本曲霉来源的酸性蛋白酶基因(AjproA1)在毕赤酵母中高效表达,经5L发酵罐高密度发酵后测得该酸性蛋白酶酶活力为669.6U·mL^-1,蛋白质量浓度为6.64mg·mL^-1。氨基酸多重序列比对结果表明:该酸性蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶A1家族,与海枣曲霉来源的酸性蛋白酶同源性最高(73%),是一个新型的酸性蛋白酶。采用强阴离子交换层析柱对该酸性蛋白酶进行纯化得到电泳级纯酶,纯化后分析测得该重组酸性蛋白酶(AjproA1)的最适催化条件为pH值3.0,反应温度为45℃,在pH值为3.0~6.0及温度为40℃以下具有良好的稳定性。该酸性蛋白酶对不同蛋白质水解的分析结果表明,该酶底物水解特异性广泛,对酪蛋白组分中的κ-酪蛋白表现出最高水解活力。利用该酸性蛋白酶对猪肉进行处理,发现该酶能够有效降低猪肉剪切力,起到嫩化效果。研究结果旨在为新型酸性蛋白酶的开发及其在肉类嫩化中的应用提供理论参考。